酵母菌计数 微生物细胞数的计数

酵母计数(微生物细胞计数)

一.目标

了解血细胞计数板的结构、控制应用和计算方法。

二、仪器和材料

显微镜、血细胞计数板、移液管、酵母液(制备见附录)。

三、血细胞计数板的结构和计算方法

血细胞计数板由比深圳网通的载玻片更厚的特殊载玻片制成。幻灯片刻有四个凹槽。中心两个凹槽之间的平面略低于其他平面，中心有一个小凹槽。凹槽两侧的平面上刻有九个大方的正方形。中间一个大方格是计数室，长宽各1毫米，深0.1毫米，容积0.1立方米，计数室有两种规格:一种是将大方格分为16个中间格，每个中间格又分为25个小格，共计400个小格；另一个规格是把慷慨度分成25格，每个格又分成16格，也就是总共400格。计算方法如下:

1.1625中计数器板的计算公式

细胞数/毫升:100个细胞中的细胞数/100400101000稀释倍数。

2.2516中计数器板的计算公式

细胞数/毫升:80个细胞/80400101000次稀释。

四.操作步骤

(1)稀释样品。为了方便计数，适当稀释样品，使每个细胞包含约5个细胞。

(2)取一块干净的血细胞计数板，用厚盖玻片覆盖中心计数室，用移液管在盖玻片边缘抽取一点足够的待测摇匀菌液，然后菌液会自行渗入计数室，然后静置5 ~ 10分钟进行计数。

(3)将血细胞计数板放在台上，用低倍镜找到小方块，然后换上高倍镜检查计数。需要连续上下旋转微调器，以便看到计数室内不同深度的细菌。以1625计数板为例，在四个角(左上、右上、左下和右下)的四个中间细胞(即100个小细胞)中计数酵母菌的数量。如果是2516大小的计数板，除了四个角上的四个中间方块外，还需要一个中间方块(即80个小方块)。对于大格子上的酵母，只统计大格子上左线的酵母或者下右线的深圳职业网上的酵母。

将每个样品计数三次，取平均值，根据公式计算出每毫升菌液中含有的酵母菌数。

图6-1血细胞计数板结构图

(4)清洗血细胞计数板。

使用后，用水龙头上的水柱冲洗血细胞计数板，不要用硬物冲洗，自己擦干或用吹风机把深圳职业网吹干。显微镜检查，检查每个隔间是否有残留细菌或其他沉积物。如果不干净，必须反复清洗，直到干净为止。

思考问题

1.结果:将结果记录在下表中。a显示了5个方块中的细菌总数；b显示细菌溶液的稀释倍数。

2516的计票委员会检查了计票记录结果

1625的计票委员会检查了计票记录结果

2.为什么用两个不同的计数板测量同一个样品，结果是一样的？

3.在计数板的计数过程中，解释血细胞计数板计数误差的重要方面有哪些？如何尽量减少误差，力求准确？

4.如何准确应用计数板计数？操作步骤和工作原理是什么？怎么算？

5.除了计数板可以计数微生物细胞，还有哪些方法可以计数细胞？

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